Anlotinib (AL3818) dihydrochloride ，安罗替尼，ALTN、 Anlotinib、 Anlotinib Hydrochloride实验方法步骤SOP
盐酸安罗替尼（Anlotinib dihydrochloride）实验方法步骤SOP
Anlotinib (AL3818) dihydrochloride ，安罗替尼（CAS#1360460-82-7 目录号D808726 请使用生理盐水而非PBS进行稀释，因为PBS可能导致沉淀。）
说明：本SOP基于安罗替尼产品信息（CAS：1360460-82-7）及相关文献制定，适用于体外细胞实验与体内动物实验，仅限科研使用，严禁用于人体及动物治疗。
一、基础信息（快速查阅）
项目 | 详情 |
CAS号 | |
化学式/分子量 | C₂₃H₂₄Cl₂FN₃O₃ / 480.36 |
纯度 | ＞99.5% |
溶解度 | DMSO 48 mg/mL；Water 96 mg/mL；严禁用PBS稀释，易产生沉淀，必须用生理盐水 |
靶点 | VEGFR、PDGFR、FGFR、c-Kit（对VEGFR2抑制IC50=0.2 nM） |
储存条件 | 粉末-20℃可稳定3年；溶液-80℃可保存1年，避光、避免反复冻融 |
二、细胞实验操作流程
1. 试剂配制（核心注意事项）
1. 储备液配制：用DMSO配制成10 mM储备液，涡旋充分溶解，瞬时离心，分装（10–50 μL/管），-20℃避光保存。
2. 工作液配制：用生理盐水稀释储备液，再用完全培养基调至所需浓度，现配现用，全程禁止使用PBS。
3. 对照组设置：溶剂对照组DMSO终浓度与药物组一致，≤0.1%。
2. 配液浓度换算表
目标浓度 | 1 mg所需溶剂 | 5 mg所需溶剂 | 10 mg所需溶剂 |
1 mM | 2.08 mL | 10.41 mL | 20.82 mL |
5 mM | 0.42 mL | 2.08 mL | 4.16 mL |
10 mM | 0.21 mL | 1.04 mL | 2.08 mL |
50 mM | 0.04 mL | 0.21 mL | 0.42 mL |
3. 细胞培养与给药
1. 细胞选择：高表达VEGFR/PDGFR/FGFR的肿瘤细胞（A549、NCI-H226、SK-OV-3、SW-620、7721等）。
2. 常规培养：含10% FBS的DMEM/RPMI-1640，37℃、5% CO₂。
3. 接种：96孔板3000–8000个/孔，贴壁12–24 h。
4. 给药：设置0.01、0.1、1、5、10 μM浓度梯度，每组3复孔，孵育48–72 h。
4. 检测方法与记录
检测指标 | 检测方法 | 操作要点 |
细胞增殖/活力 | CCK-8/MTT | 450 nm测OD，计算抑制率与IC50 |
细胞凋亡 | Annexin V-FITC/PI流式 | 避光处理，上机检测 |
信号通路抑制 | Western blot | 检测p-VEGFR2、p-PDGFRβ、p-ERK、p-AKT |
克隆形成 | 结晶紫染色 | 给药10–14 d，计数克隆数 |
迁移/侵袭 | Transwell | 计数穿膜细胞数 |
三、动物实验操作流程
1. 动物与模型准备
动物：SPF级裸鼠、C57BL/6小鼠、SD大鼠；体重18–22 g，雌雄各半。
模型：人源肿瘤皮下异种移植瘤（肺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌、胶质瘤等）。
伦理：遵循IACUC规范，适应环境3–5 d，肿瘤体积达100–200 mm³开始给药。
2. 给药方案
1. 配制：用生理盐水溶解，禁止添加PBS，现配现用。
2. 剂量：1.5–6 mg/kg，口服灌胃（i.g.），每日1次。
3. 周期：连续21–28 d，观察肿瘤生长与动物状态。
3. 给药日历模板
实验天数 | 剂量（mg/kg） | 途径 | 体重（g） | 肿瘤体积（mm³） | 备注 |
Day 1 | i.g. | ||||
Day 2 | i.g. | ||||
Day 3 | i.g. | ||||
Day 4–7 | i.g. | ||||
Day 8–28 | i.g. |
4. 观测指标与终点
1. 日常监测：每日记录体重、精神、饮食，体重下降＞10%需暂停给药。
2. 肿瘤测量：每2–3 d测长径a、短径b，体积V = a×b²/2。
3. 终点取材：脱颈处死，剥离肿瘤，称重、拍照，做Western blot、IHC（Ki-67、CD31、p-VEGFR2）。
4. 关键结果：有效剂量显著抑制肿瘤生长，抑瘤率＞60%，动物耐受良好。
四、安全与合规提醒
1. 仅限体外细胞与动物科研，严禁临床/人体/动物治疗使用。
2. 全程禁止用PBS稀释，必须用生理盐水，防止沉淀。
3. DMSO操作在通风橱进行，佩戴防护用具，避免接触与吸入。
4. 药物储存严格-20℃避光，储备液避免反复冻融。
5. 动物灌胃控制体积与速度，防止误吸；废弃物按危化品处理。
五、应急与技术支持
产品咨询/技术支持：全国免费电话400-168-1698；邮箱info@DKM.cn
（注：* 上述方法来自公开文献，仅供相同目的实验参考。如实验目的、材料、方法不同，请参考其他文献。）
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