• 生物活性

靶点及简介 ：Selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor，

Celecoxib是一种选择性COX-2抑制剂，在Sf9细胞中IC50为40 nM。

塞来昔布有NSAIDs的抗炎镇痛作用。由于其化学结构的特点，本品可以与COX-2结合，且对COX-2有选择性的抑制作用。塞来昔布的苯基与COX-2的疏水通道结合，亲水的磺胺基与COX-2“侧袋”内的513 位精氨酸及90位组氨酸形成氢链。本品又与COX-2120位置的精氨酸密切结合而起到了抑制COX-2对花生四烯酸转化为对人体不利的前列腺素的作用，由于COX-1与COX-2结构的细微差别，该药不能进入COX-1的分子内，也不能抑制COX-1转化花生四烯酸为前列腺素的作用。因此，本品有良好的抗炎镇痛、保护胃黏膜、维持肾血流量、调节血小板凝聚作用，又解决了常用NSAIDs的消化道刺激作用。

体外研究

    选择性环加氧酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(10-75μM)以剂量依赖性方式抑制NPC细胞系的增殖。塞来昔布(25和50μM)诱导NPC细胞系中G0/G1检查点的细胞凋亡和细胞周期停滞,这与STAT3磷酸化显着降低有关。 STAT3下游的基因(即Survivin,Mcl-1,Bcl-2和Cyclin D1)在暴露于塞来昔布(25和50μM)后显着下调[2]。

体内研究

    塞来昔布表现出有效的口服抗炎活性。塞来昔布在角叉菜胶水肿试验中减少急性炎症,ED50为7.1mg/kg,并且在佐剂关节炎模型中减少慢性炎症,ED50为0.37mg/kg /天。此外,塞来昔布在Hargreaves痛觉过敏模型中也表现出镇痛活性,ED50为34.5mg/kg。塞来昔布具有与标准非甾体抗炎药(NSAID)相当的效力,但在剂量高达200mg/kg的大鼠中没有表现出急性GI毒性。此外,在10天内剂量高达600 mg/kg /天的大鼠中没有显示出慢性GI毒性[1]。在喂食高脂肪饮食(肥胖)并用塞来昔布治疗的KpB小鼠中,与对照动物相比,肿瘤重量减少66％。在喂食低脂饮食(非肥胖)的KpB小鼠中,用塞来昔布治疗后肿瘤重量减少了46％[3]。大鼠模型口服给塞来昔布(20mg/kg)和/或肌肉注射法舒地尔(10mg/kg)2周。结果表明,联合使用塞来昔布和法舒地尔可显着降低脊髓损伤大鼠病灶周围COX-2和Rho激酶II的表达,改善损伤脊髓的病理形态,促进运动功能的恢复[4] 。

细胞实验

    使用MTT测定评估塞来昔布对NPC细胞的抗增殖作用。将细胞接种到96孔板中并使其附着24小时。然后用溶解在DMSO中的递增浓度的塞来昔布（0,5,10,25,50或75μM）处理细胞（终浓度≤0.1％）并孵育最多48小时。温育后，向每个孔中加入20μLMTT染料（5mg / mL），并将细胞在37℃下孵育4小时。除去上清液后，将晶体溶解在DMSO中，在490nm处测量吸光度。生长抑制百分比计算为（ODcontrol-ODdrug）/ ODcontrol×100％。使用SPSS 15.0软件使用概率回归计算半数最大抑制浓度（IC 50）值和95％置信区间。实验一式三份进行，并重复至少三次[2]。

动物实验

    小鼠[3]通过触诊每周监测KpB小鼠的肿瘤生长。在HFD（肥胖组）和LFD（非肥胖组）（每组N = 15只小鼠）的小鼠中触诊1cm肿瘤后开始塞来昔布和安慰剂治疗。塞来昔布以5mg / mL溶解在DMSO中，在含有0.025％吐温80的0.5％甲基纤维素中进一步稀释10倍，并且每天以5mg / kg体重的剂量注射（IP）4周。通过触诊每周测量一次肿瘤大小。使用以下等式计算肿瘤体积：体积（mm 3）= a×b2 / 2，其中最大直径，b是最小直径。在整个研究期间每周称重动物。在处死时，称重小鼠并取血样。将一半的卵巢肿瘤快速冷冻并储存在-80℃，另一半固定在10％中性缓冲的福尔马林中并石蜡包埋。还收获小鼠心脏，肺和肾脏，用福尔马林固定，并在石蜡包埋前仔细检查任何可疑病变。大鼠[4]使用40只3月龄，体重280-330g的成年，清洁，雌性，Sprague-Dawley大鼠。将40只大鼠随机分为5组：假手术，模型，塞来昔布，法舒地尔和联合用药组，每组8只。塞来昔布组的大鼠用塞来昔布（20mg / kg）的悬浮液灌胃给药，由胶囊制备含有0.5％羧甲基纤维素钠的塞来昔布悬浮液。法舒地尔组大鼠通过背部肌肉注射盐酸法舒地尔（10mg / kg）肌内注射。联合组大鼠给予塞来昔布（20mg / kg）和法舒地尔盐酸盐（10mg / kg）的悬浮液。法舒地尔和塞来昔布剂量基于给予成人的剂量，并且这些剂量在预研究中进行调整。每天给药一次，持续2周。随后，将所有大鼠正常治疗另外2周，然后处死用于组织学检查或用于蛋白质印迹分析。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Penning TD, et al. Synthesis and biological evaluation of the 1,5-diarylpyrazole class of cyclooxygenase-2 inhibitors: identification of 4-[5-(4-methylphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]benze nesulfonamide (SC-58635, celecoxib). J Med Chem. 1997

[2]. Liu DB, et al. Celecoxib induces apoptosis and cell-cycle arrest in nasopharyngeal carcinoma cell lines via inhibition of STAT3 phosphorylation. Acta Pharmacol Sin. 2012 May;33(5):682-90.

[3]. Suri A, et al. The effect of celecoxib on tumor growth in ovarian cancer cells and a genetically engineered mouse model of serous ovarian cancer. Oncotarget. 2016 Apr 8.

[4]. Hou XL, et al. Combination of fasudil and celecoxib promotes the recovery of injured spinal cord in rats better than celecoxib or fasudil alone. Neural Regen Res. 2015 Nov;10(11):1836-40.

[5]. Liu C, et al. Celecoxib alleviates nonalcoholic fatty liver disease by restoring autophagic flux. Sci Rep. 2018 Mar 7;8(1):4108.

• 溶解度及制备方案
  

  浓度/溶剂体积/质量	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.6221 mL	13.1106 mL	26.2213 mL
  5 mM	0.5244 mL	2.6221 mL	5.2443 mL
  10 mM	0.2622 mL	1.3111 mL	2.6221 mL
  50 mM	0.0524 mL	0.2622 mL	0.5244 mL