• 生物活性

靶点及简介 ：Deubiquitinase (DUB) inhibitor, Cell permeable

一种选择性的去泛素化酶(DUB: USP5， UCH-L1， USP9x， USP14， UCH37)抑制剂，也抑制Bcr/Abl，也是一种JAK2传感器(不影响20S蛋白酶体)和转录激活剂(STAT)。

体外研究

    Degrasyn,一种小分子,特异性地快速下调野生型和突变型Bcr/Abl蛋白,而不影响慢性粒细胞白血病(CML)细胞中bcr/abl基因的表达。 Degrasyn比正常CD34 +造血前体,真皮成纤维细胞或内皮细胞(IC50~5-10μM)更有效诱导髓样和淋巴肿瘤细胞凋亡(IC50 0.5至2.5μM)。 Degrasyn通过一种独特的机制降低Bcr/Abl蛋白水平,该机制不受干扰甲磺酸伊马替尼结合的突变的影响。 Degrasyn抑制野生型和T315I突变体Bcr/Abl蛋白的磷酸化,如BV173和BV173R细胞中磷酸酪氨酰-Bcr/Abl的快速消失(1小时内)所证明。 Degrasyn诱导的Bcr/Abl下调伴随着CML细胞的凋亡[1]。用Degrasyn处理以剂量依赖性方式在所有测试的细胞系中产生抗增殖作用。值得注意的是,用Degrasyn治疗导致NCH644和NCH421K神经胶质瘤干细胞样细胞的显着抗增殖活性和形态学变化。用Degrasyn治疗导致6小时后Mcl-1 mRNA水平的剂量依赖性和可能的代偿性增加,并且在24小时后仅略微减少。对于Usp9X水平观察到类似的发现。这些数据表明Degrasyn通过转录后机制下调Mcl-1和Usp9X [2]。

体内研究

    Degrasyn抑制K562异种移植肿瘤的生长以及移植到裸鼠中的野生型Bcr/Abl和T315I突变体Bcr/Abl表达的BaF/3细胞的生长。为了评估Degrasyn对CML的可能的治疗活性,裸鼠接受K562细胞的皮下移植,并且在可触知的肿瘤形成(10天)后每隔一天用30mg/kg Degrasyn处理9天。该剂量和方案在其他肿瘤模型中具有良好的耐受性和有效性。将抗肿瘤活性与每日甲磺酸伊马替尼治疗(50mg/kg)后的抗肿瘤活性进行比较。肿瘤接种后19天,对照组肿瘤达到最大允许尺寸,评估治疗效果。 Degrasyn治疗抑制K562肿瘤生长至与甲磺酸伊马替尼治疗动物中观察到的程度相当的程度,表明Degrasyn在减少已建立的K562肿瘤的生长方面具有活性[1]。

细胞实验

    将CML细胞接种在96孔板（2×10 4个细胞/孔）中，并在100μL培养基的最终体积中加入Degrasyn，甲磺酸伊马替尼或达沙替尼（0.08-10μM）。将平板在37℃温育72小时，然后加入20μLMTT试剂（原液5mg / mL），并将平板在37℃再温育2小时。用100μL裂解缓冲液（20％SDS的50％N，N-二甲基甲酰胺溶液，用80％乙酸和1M盐酸调节pH至4.7;乙酸的最终浓度为2.5％，盐酸为2.5％）裂解细胞。并孵育6小时。使用SPECTRA MAX M2读板仪测定每个样品在570nm处的光密度[1]。

动物实验

    小鼠[1]为了评估针对T315I Bcr / Abl突变细胞的活性，将用野生型Bcr / Abl或T315I突变体转染的BaF / 3细胞移植到雌性瑞士裸鼠（5-6周龄）中。将BaF / 3wt细胞悬浮于RPMI培养基中（5×10 7个细胞/ mL），并将0.1mL该悬浮液静脉内注射到10只小鼠中。使用相同的方法用BaF / 3 / T315I细胞接种10只小鼠。肿瘤细胞接种后一天，将小鼠随机分配到3组中的1组：每隔一天在50μLDMSO/ PEG300（载体）中接受Degrasyn（40mg / kg，腹膜内）（7次注射）;另一例在车辆中每天接受甲磺酸伊马替尼（100 mg / kg，腹腔注射）（14次注射）;每天第三次接受车辆（14次注射）。收集每只小鼠的脾脏，拍照，并在肿瘤细胞接种后15天称重。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1] Perry JW et al. PLoS Pathog. Antiviral activity of a small molecule deubiquitinase inhibitor occurs via induction of the unfolded protein response.

[2] Kapuria V et al. Cell Signal. A novel small molecule deubiquitinase inhibitor blocks Jak2 signaling through Jak2 ubiquitination.

[3] Kapuria V et al. Cancer Res. Deubiquitinase inhibition by small-molecule WP1130 triggers aggresome formation and tumor cell apoptosis.

[4] Bartholomeusz GA et al. Blood. Activation of a novel Bcr/Abl destruction pathway by WP1130 induces apoptosis of chronic myelogenous leukemia cells.

• 溶解度及制备方案

DMSO	77 mg/mL (200.38 mM)
Water	Insoluble
Ethanol	50 mg/mL (130.12 mM)

Preparing Stock Solutions

Concentration  Volume   Mass	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.6023 mL	13.0117 mL	26.0234 mL
5 mM	0.5205 mL	2.6023 mL	5.2047 mL
10 mM	0.2602 mL	1.3012 mL	2.6023 mL
50 mM	0.0520 mL	0.2602 mL	0.5205 mL

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