• 生物活性

靶点及简介 ：Selective ROCK2 inhibitor，SLx-2119 是具有口服活性，选择性的 ROCK2 抑制剂，IC50 值为 105 nM。其IC50和Ki分别为60 nM和41 nM。Phase 2。

体外研究：

    SLx-2119（40μM）诱导PASMC中Tsp-1和CTGF mRNA水平的显着下调。与用SLx-2119处理的HMVEC的RNA杂交的微阵列显示出比其他阵列高5倍的背景[1]。

体内研究：

    KD025（100,200或300mg / kg，ip）剂量依赖性地减少短暂的大脑中动脉闭塞后的梗塞体积。 KD025在老年人，糖尿病患者或雌性小鼠中至少与正常成年男性一样有效[2]。

激酶实验：

    进行无细胞酶测定以确定SLx-2119对ROCK1和ROCK2的选择性抑制。在非结合表面微孔板上进行反应。使用4 mU人ROCK1和ROCK2磷酸化30μM合成ROCK肽底物S6 Long，在American Peptide中制备，加入10μMATP，在10mM Mg 2 +，50mM Tris存在下含有33P-ATP，在室温下pH 7.5,0.1mM EGTA和1mM DTT。一个单位是催化1nmol磷酸盐/分钟转移至肽所需的激酶量。使反应进行45分钟，然后用3％磷酸终止反应至终浓度为1％。在磷酸纤维素过滤微孔板上捕获反应，并使用真空歧管用75mM磷酸和甲醇洗涤。在Perkin-Elmer MicroBeta 1450上测量磷酸化。

细胞实验：    Western印迹用于确定HMVEC，NHDF和PASMC是否表达ROCK1和ROCK2。将细胞在含有SLx-2119的3mL培养基中温育24小时。在第3代收集所有细胞，并在冰上在25mM Tris-HCl pH 7.5,150mM NaCl，0.5％tritonX-100,10％甘油，10mM NaF和蛋白酶抑制剂混合物中裂解。使用BCA蛋白质测定试剂测定蛋白质浓度。在7.5％或12.5％SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶上分离细胞裂解物（35μg）并转移至PVDF膜滤器。将膜在含有0.1％吐温20的TBS中的5％脱脂乳中封闭。用ROCK1，ROCK2或肌动蛋白的抗体探测印迹，并在与HRP缀合的二抗孵育之前充分洗涤，并用增强的化学发光（ECL）试剂盒观察。 。

动物实验：    在所有实验中使用年龄（C57BL / 6,2-3个月大，雄性22-30g，雌性16-23g），年龄（C57BL / 6,12个月大，33-52g）。通过口胃管饲法每12小时施用载体（0.4％甲基纤维素）或KD025（100,200或300mg / kg）。基于小鼠口服给药后的药代动力学特征选择给药范例。将阿托伐他汀（4mg / mL）溶解于含有45％3-羟丙基-β-环糊精和10％乙醇的磷酸盐缓冲盐水（pH7.4）中，以每天20mg / kg的剂量给药，每日一次腹膜内注射注射2周..

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Boerma, M., et al. Comparative gene expression profiling in three primary human cell lines after treatment with a novel inhibitor of Rho kinase or atorvastatin. Blood Coagul Fibrinolysis, 2008. 19(7): p. 709-18.

[2]. Lee, J.H., et al. Selective ROCK2 Inhibition In Focal Cerebral Ischemia. Ann Clin Transl Neurol, 2014. 1(1): p. 2-14.

[3]. Yang W, et al. Critical role of ROCK2 activity in facilitating mucosal CD4⁺ T cell activation in inflammatory bowel disease. J Autoimmun. 2018 May;89:125-138.

[4]. Chen W, et al. Screening RhoA/ROCK inhibitors for the ability to prevent chronic rejection of mouse cardiac allografts.Transpl Immunol. 2018 Jun 6. pii: S0966-3274(18)30029-7.

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO	90 mg/mL   (198.89 mM)
  Ethanol	Insoluble
  Water	Insoluble

  
  

  Preparing Stock Solutions

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.21 mL	11.05 mL	22.10 mL
  5 mM	0.44 mL	2.21 mL	4.42 mL
  10 mM	0.22 mL	1.10 mL	2.21 mL
  50 mM	0.04 mL	0.22 mL	0.44 mL