• 生物活性

靶点及简介 ：GSK-3α/β inhibitor,GSK-3α/β inhibitor,Laduviglusib (CHIR-99021) HCl是CHIR-99021的盐酸盐, 是GSK-3α/β抑制剂，IC50为10 nM/6.7 nM。其对GSK-3的选择性比对Cdc2和ERK2高500倍以上。CHIR-99021 是一种有效的药理性的 Wnt/beta-catenin 信号通路的激活剂。CHIR-99021 可显著地拯救光诱导的 autophagy，并可增强 GR，RORα和自噬相关蛋白等表达。

体外研究：

    CHIR 99021抑制人GSK-3β，Ki值为9.8 nM [1]。 CHIR 99021是一种小有机分子，通过竞争其ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶检测显示CHIR 99021特异性抑制GSK3β（IC50 = ~5 nM）和GSK3α（IC50 = ~10 nM），对其他激酶的影响很小[2]。在CHIR-99021存在下，ES-D3细胞的存活率在2.5μM时降低24.7％，在5μM时降低56.3％，在7.5μM时降低61.9％，在10μMCHIR-99021时降低69.2％，IC50为4.9μM [3]。

体内研究:

    在ZDF大鼠中，单次口服剂量的CHIR 99021（16mg / kg或48mg / kg）迅速降低血浆葡萄糖，给药后3-4小时最大降低近150mg / dl [1]。在照射前4小时给予CHIR99021（2mg / kg）一次，在14.5Gy腹部照射（ABI）后显着提高存活率。 CHIR99021处理显着阻断了隐窝细胞凋亡和p-H2AX +细胞的积累，并改善了隐窝再生和绒毛高度。 CHIR99021治疗通过阻断细胞凋亡来增加Lgr5 +细胞存活率，并且有效地防止Olfm4，Lgr5和CD44的减少早在4小时[4]。

激酶实验:

    通过使用其His或Glu标签从SF9细胞中纯化激酶。纯化Glu标记的蛋白质，纯化His标记的蛋白质。激酶测定在96孔板中用适当的肽底物在300μL反应缓冲液中进行（50mM Tris-HCl，pH 7.5,10mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM的变化） NaF和0.01％牛血清白蛋白）。肽的Km值为1至100μM。将CHIR 99021或CHIR GSKIA加入3.5μLMe2SO中，然后加入ATP至终浓度为1μM。温育后，将三份100μL等分试样转移至含有100μL/孔50μMATP和20mM EDTA的Combiplate 8平板。 1小时后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，30分钟后在闪烁计数器中计数。所有步骤均为室温。抑制百分比计算为100×（抑制剂 - 无酶对照）/（Me2SO对照 - 无酶对照）[2]。

细胞实验:

    使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。 MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力;这种减少与细胞活力的丧失相关。将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。所有测试条件一式三份进行分析[3]。

动物实验:

    大鼠[1]制备重量<140g的雄性Sprague Dawley大鼠的原代肝细胞，并在分离后1-3小时使用。将等份的1×10 6个细胞在1mL DMEM / F12培养基加0.2％BSA和CHIR 99021（口服16或48mg / kg）或对照中在12孔板中在低速振荡器上于37℃孵育30分钟。在富含CO 2的气氛中，通过离心收集并在缓冲液A加0.01％NP40中冷冻/解冻裂解;再次进行GS测定。小鼠[4]使用6-10周龄的小鼠。对C57BL / 6背景（F10）和Lgr5-EGFP（Lgr5-EGFP-IRES-creERT2）小鼠的PUMA + / +和PUMA - / - 同窝小鼠进行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。在放射前4小时腹膜内（ip）注射2mg / kg CHIR99021或在放射前28小时和1小时/ 1mg SB415286注射小鼠。处死小鼠以收集小肠用于组织学分析和蛋白质印迹。在处死前，所有小鼠腹膜内注射100mg / kg BrdU。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1] Ring DB, et al. Diabetes. Selective glycogen synthase kinase 3 inhibitors potentiate insulin activation of glucose transport and utilization in vitro and in vivo.

• 溶解度及制备方案
  

  Solubility Data

  	Solvent	Max Conc. mg/mL	Max Conc. mM
  Solubility
  	DMSO	80.0	159.43
  	Ethanol	47.0	93.66
  	Water	7.14	14.23

  Preparing Stock Solutions

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	1.99 mL	9.96 mL	19.93 mL
  5 mM	0.40 mL	1.99 mL	3.99 mL
  10 mM	0.20 mL	1.00 mL	1.99 mL
  50 mM	0.04 mL	0.20 mL	0.40 mL

  
  
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