• 生物活性

靶点及简介 ：paradox-breaker RAF inhibitor, potent and selective

一种有效的选择性BRAF抑制剂，在突变型RAS表达细胞中对BRAF^V600E的IC50值为5 nM。PLX7904抑制两种黑素瘤细胞系（A375和COLO829）和另一种人结直肠癌细胞系COLO205的体外生长。PLX7904抑制PLX470抗性细胞系中的ERK1/2。PLX7904处理促进细胞凋亡并抑制vemurafenib抗性细胞的贴壁依赖性生长。

体外研究：

    PLX7904抑制两种黑素瘤细胞系（A375和COLO829）和另一种人结直肠癌细胞系COLO205的体外生长，其表达BRAFV600E，IC50值分别为0.17μM，0.53μM和0.16μM，与vemurafenib IC50相当。在相同测定中的值（分别为0.33μM，0.69μM和0.25μM）[1]。 PLX7904和PLX8394有效抑制PRT细胞以及亲代细胞中ERK1 / 2驱动的GAL4-Elk1报告基因活性。 1μM浓度的PLX7904和PLX8394处理可降低亲代细胞中的集落形成和活力，达到与PLX4720相似的水平[2]。 PPLX7904有效抑制突变BRAF黑素瘤细胞中ERK1 / 2的磷酸化，而不会在野生型BRAF，突变型NRAS黑素瘤细胞中引发反常激活。 PPLX7904抑制PLX470抗性细胞系中的ERK1 / 2。 PPLX7904处理促进细胞凋亡并抑制vemurafenib抗性细胞的贴壁依赖性生长[3]。

细胞实验

    对于MTT测定，将2×103个细胞在其常规培养基（含有PRX系的PLX4720）的96孔中一式三份接种。第二天，用PBS洗涤细胞两次，然后补充含有指定的RAF抑制剂的培养基。 48小时后更换培养基，再过48小时后，向孔中加入10μL5mg/ mL MTT试剂，并培养3小时。然后将Formazan晶体用1:10稀释的0.1M甘氨酸（pH 10.5）在DMSO中溶解过夜。然后在Multiskan®频谱分光光度计中以450nM分析孔。所描绘的结果归一化为DMSO条件，并且是三个独立实验的复合物。显示的误差棒代表平均值的标准误差（SEM）。

动物实验

    将COLO205肿瘤细胞在补充有牛胰岛素的DMEM 10％FBS 1％青霉素/链霉素中于37℃培养。 Balb / C裸鼠，雌性，6-8周龄，体重约18-22g，在右侧皮下接种COLO205肿瘤细胞（5×106）在0.1mL PBS中与基质胶混合（50:50）用于肿瘤发展。当平均肿瘤大小达到约100mm 3时开始治疗，每个治疗组中的8只小鼠随机化以平衡平均体重和肿瘤大小。 B9细胞在DMEM 10％FBS 1％青霉素/链霉素中扩增。胰蛋白酶消化后，用20mL RPMI洗涤细胞三次，并在最后离心后重新悬浮，计数，并按体积调节至终浓度为5×107个细胞/毫升。通过在6至7周龄雌性裸Balb / c小鼠中皮下注射5×10 6个细胞开始B9异种移植物。当肿瘤的平均大小达到50-70 mm3时，化合物开始给药。将动物平均分布在治疗组（n = 10）上以平衡肿瘤的平均大小和体重。每天两次口服给予动物1-14天，每天给药15-28天，每天用载体，vemurafenib 50mg / kg，或PLX7904 50mg / kg。在第3周和第4周，在200μL丙酮中以2μg的剂量将12-O-十四烷基佛波醇-13-乙酸酯（TPA）放置在所有小鼠的皮肤上，每周两次。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Zhang C, et al. RAF inhibitors that evade paradoxical MAPK pathway activation. Nature. 2015 Oct 22;526(7574):583-586.

[2]. Basile KJ, et al. Inhibition of mutant BRAF splice variant signaling by next-generation, selective RAF inhibitors. Pigment Cell Melanoma Res.

[3]. Le K, et al. Selective RAF inhibitor impairs ERK1/2 phosphorylation and growth in mutant NRAS, vemurafenib-resistant melanoma cells. Pigment Cell Melanoma Res.

• 溶解度及制备方案

DMSO	100 mg/mL   (195.11 mM)
Water	Insoluble
Ethanol	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积     质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	1.9511 mL	9.7555 mL	19.5111 mL
5 mM	0.3902 mL	1.9511 mL	3.9022 mL
10 mM	0.1951 mL	0.9756 mL	1.9511 mL
50 mM	0.0390 mL	0.1951 mL	0.3902 mL

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