• 生物活性

靶点及简介 ：ROCK inhibitor

Thiazovivin是一种新型ROCK抑制剂，无细胞试验中IC50为0.5 μM，在单细胞分离后，促进人胚胎干细胞（hESC）的存活。

体外研究：

    Thiazovivin是一种ROCK抑制剂。 Thiazovivin(2μM)抑制ROCK活性并保护人胚胎干细胞(hESCs)。 Thiazovivin在解离后显着增加hESC的存活率,同时保持多能性。 Thiazovivin增强细胞-ECM粘附介导的整合素信号传导。细胞离解后,Thiazovivin也能稳定E-钙粘蛋白,从而在无ECM条件下保护hESCs免于死亡[1]。 Thiazovivin增加了牛胚胎干细胞样细胞(eSLC)的细胞附着和饲养层上原代菌落的形成。 Thiazovivin强化假定的菌落生长并支持在传代培养期间eSLC培养物的扩增。此外,Thiazovivin在牛的eSLCs中引起外胚层谱系特异性基因的更多表达[2]。

细胞实验

    对于细胞增殖测定，胚胎衍生的干细胞样细胞（eSLC）被新传代并在无饲养细胞条件下在3i系统中培养48小时，以防止BrdU阳性饲养细胞的污染。将细胞用PBS中的4％多聚甲醛（pH7.4）在37℃下固定2小时，用PBS中的2N HCl在45℃下酸处理30分钟，用0.1M硼酸盐缓冲液（pH8.5）平衡，并且最后用封闭缓冲液（20％小牛血清; 0.1％Triton X-100; PBS中的1％DMSO）孵育2小时。用针对抗BrdU小鼠单克隆抗体IgG的抗体对固定的细胞进行免疫染色，然后与第二抗体FITC缀合的山羊抗小鼠IgG一起温育。处理过的细胞用DAPI缓慢褪色抗褪色覆盖，用于核染色，并用玻璃盖玻片覆盖。用荧光显微镜捕获图像[2]。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Xu Y, et al. Revealing a core signaling regulatory mechanism for pluripotent stem cell survival and self-renewal by small molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 May 4;107(18):8129-34.

[2]. Park S, et al. Thiazovivin, a Rho kinase inhibitor, improves stemness maintenance of embryo-derived stem-like cells under chemically defined culture conditions in cattle. Anim Reprod Sci. 2015 Oct;161:47-57.

• 溶解度及制备方案

DMSO	63 mg/mL(202.34 mM)
Water	Insoluble
Ethanol	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积    质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	3.2117 mL	16.0586 mL	32.1172 mL
5 mM	0.6423 mL	3.2117 mL	6.4234 mL
10 mM	0.3212 mL	1.6059 mL	3.2117 mL
50 mM	0.0642 mL	0.3212 mL	0.6423 mL

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