• 生物活性

靶点及简介 ：VEGFR2/Met/Ret/Kit/FLT//AXL inhibitor，Cabozantinib是一种有效的多受体酪氨酸激酶抑制剂， 抑制VEGFR2，c-Met，Kit，Axl 和 Flt3 的 IC50 分别为0.035，1.3，4.6，7 和 11.3 nM。

Cabozantinib (XL184, BMS-907351)是一种有效的VEGFR2抑制剂，在无细胞试验中IC50为0.035 nM，也能有效抑制c-Met、 Ret、 Kit、Flt-1/3/4、Tie2和AXL，IC50分别为1.3 nM，4 nM，4.6 nM，12 nM/11.3 nM/6 nM，14.3 nM 和 7 nM。Cabozantinib 在结肠癌细胞中可通过AKT/GSK-3β/NF-κB信号通路诱导PUMA依赖的凋亡。

体外研究：

    Cabozantinib是MET和VEGFR2的有效抑制剂，IC50值分别为1.3和0.035 nM。 Cabozantinib也抑制MET激活激酶结构域突变Y1248H，D1246N或K1262R（分别为IC50 = 3.8,1.18和14.6nM）。卡博替尼显示出对几种激酶的强烈抑制作用，这些激酶也与肿瘤病理生理学有关，包括KIT，RET，AXL，TIE2和FLT3（分别为IC50 = 4.6,5.2,7,14.3和11.3nM）。在细胞试验中，Cabozantinib抑制MET和VEGFR2以及KIT，FLT3和AXL的磷酸化，IC50值分别为7.8,1.9,5.0,7.5和42μM。在许多人肿瘤细胞系中评估了Cabozantinib对增殖的作用。携带扩增MET的SNU-5和Hs746T细胞对Cabozantinib最敏感（IC50分别为19和9.9 nM）;然而，缺乏MET扩增的SNU-1和SNU-16细胞更具抗性（IC50分别为5,223和1,149nM）。 MDA-MB-231和U87MG细胞对Cabozantinib的敏感性水平相当（IC50分别为6,421和1,851 nM），而H441，H69和PC3细胞系对Cabozantinib最不敏感，IC50值为21,700,20,200，分别为10,800 nM。此外，与野生型BaF3细胞（IC50 = 9,641 nM）相比，表达人FLT3-ITD（急性髓性白血病中的活化突变）的BaF3细胞对Cabozantinib敏感（IC50 = 15 nM）[2]。

体内研究：

    Cabozantinib（XL184）后肿瘤血管分布减少，3 mg / kg时降低67％，30 mg / kg降低83％[1]。在小鼠模型中，Cabozantinib显着改变肿瘤病理学，导致肿瘤和内皮细胞增殖减少，同时增加细胞凋亡和乳腺癌，肺癌和胶质瘤肿瘤模型中肿瘤生长的剂量依赖性抑制。重要的是，用Cabozantinib治疗不会增加转移实验模型中的肺肿瘤负荷，已经观察到VEGF信号传导抑制剂不靶向MET。基于体重剂量，Cabozantinib血浆暴露在大鼠中比在小鼠中高6至10倍，这导致在大鼠中诱导肿瘤生长抑制/消退的较低剂量比在小鼠中小。卡博替尼的亚慢性给药在小鼠和大鼠中具有良好的耐受性，没有毒性迹象，这通过在治疗期间稳定和/或增加体重来确定[2]。

激酶实验：

    使用荧光素酶偶联的化学发光，33P-磷酰基转移或AlphaScreen技术测定Cabozantinib对270种人激酶的广泛组的抑制特性。使用重组人全长，谷胱甘肽S-转移酶标签或组氨酸标签融合蛋白，并且通过测量每种相应激酶在Km或低于Km的ATP浓度下肽底物聚（Glu，Tyr）的磷酸化来确定IC 50值。通过测定ATP浓度范围内的IC50值，使用AlphaScreen Assay评估激酶抑制的机制[2]。

细胞实验：    在多种人肿瘤细胞系中评估了Cabozantinib对增殖的影响，包括含有扩增的MET，SNU-1和SNU-16细胞的SNU-5和Hs746T细胞，MDA-MB-231和U87MG细胞，H441，H69，和PC3细胞系，以及BaF3细胞。将细胞在含有10％FBS的培养基中一式三份接种过夜。第二天，用连续稀释的Cabozantinib处理细胞48小时，然后使用Cell Proliferation ELISA，BrdUrd分析增殖[2]。

动物实验：

    小鼠[1] C57BL / 6背景中的RIP-Tag2小鼠用作肿瘤模型。除非另有说明，否则RIP-Tag2小鼠在治疗开始时为10周龄。将Cabozantinib以5mg / mL的浓度悬浮于无菌盐水或水中，并通过管饲法每天施用7天。每天通过强饲法治疗7天的小鼠研究剂量依赖性效应：XL880（1,10,20,40或60 mg / kg），Cabozantinib（3,10,30,40或60 mg / kg）或XL999 （25,40,50,60或75 mg / kg）。在用XL880（40mg / kg）处理6小时，1,4,7或14天的小鼠中研究作用的时间过程。在用XL880（40mg / kg）处理7天的小鼠中研究戒断的影响，然后在0天，2天，7天或14天不进行治疗。每组含有4-6只小鼠。小鼠[2]使用雌性nu / nu小鼠。将H441细胞（3×106）皮内植入后腹部，当肿瘤达到约150mg时，使用下式计算肿瘤重量:(肿瘤体积=长度（mm）×宽度2（mm2）] / 2，小鼠随机分组（每组n = 5）并口服单次100mg / kg剂量的Cabozantinib或载体。在指定的时间点收集肿瘤。合并的肿瘤裂解物用抗MET进行免疫沉淀，并用抗磷酸酪氨酸MET进行Western印迹。印迹剥离后，定量总MET作为上样对照。大鼠[2]在雌性Wistar大鼠的第0天，将C6细胞（5×106）皮下接种到后腹部。当肿瘤达到约250mg（3）植入后4天），将大鼠随机分组（每组8只）并用卡博替尼或水载体口服，每日一次口服治疗12天。通过口服强饲法以2mL / kg给予卡博替尼。每日收集体重，并测量肿瘤重量每周收集两次。百分比肿瘤生长抑制/回归值表示如下：1 - [（第0天的平均治疗肿瘤重量 - 第0天的平均肿瘤重量）/（最后一天的平均载体肿瘤重量 - 第0天的平均肿瘤重量）] ×100。通过单向ANOVA进行Cabozantinib治疗的肿瘤与媒介物治疗的肿瘤相对于给药前肿瘤的统计学分析，其显着性定义为P <0.05。在最终剂量后4小时收集血液，并制备血浆以确定卡博替尼的浓度。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. You WK, et al. VEGF and c-Met blockade amplify angiogenesis inhibition in pancreatic islet cancer. Cancer Res, 2011, 71(14), 4758-4768.

[2]. Yakes FM, et al. Cabozantinib (XL184), a novel MET and VEGFR2 inhibitor, simultaneously suppresses metastasis, angiogenesis, and tumor growth. Mol Cancer Ther, 2011, 10(12), 2298-2308.

[3]. Fuse MA, et al. Combination Therapy With c-Met and Src Inhibitors Induces Caspase-Dependent Apoptosis of Merlin-Deficient Schwann Cells and Suppresses Growth of Schwannoma Cells. Mol Cancer Ther. Mol Cancer Ther. 2017 Nov;16(11):2387-2398.

• 溶解度及制备方案
  

  Solubility Data

  	Solvent	Max Conc. mg/mL	Max Conc. mM
  Solubility
  	DMSO	46.29	92.3
  	DMSO:PBS (pH 7.2) (1:2)	0.3	0.6
  	DMF	3.0	5.98
  	Ethanol	2.0	3.99

  Preparing Stock Solutions

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	1.99 mL	9.97 mL	19.94 mL
  5 mM	0.40 mL	1.99 mL	3.99 mL
  10 mM	0.20 mL	1.00 mL	1.99 mL
  50 mM	0.04 mL	0.20 mL	0.40 mL