• 生物活性

靶点及简介 ：CDK inhibitor

Ribociclib (LEE011) hydrochloride 是一种高度特异性的针对 CDK4 和 CDK6 的双重抑制剂，对应的IC50值分别为10 nM和39 nM。

体外研究：

       Palbociclib（PD 0332991）在MDA-MB-435乳腺癌细胞中降低Ser780处视网膜母细胞瘤（Rb）磷酸化的IC50为66nM。 Palbociclib同样有效地降低了该肿瘤中Ser795的Rb磷酸化，IC50为63 nM，在Colo-205结肠癌中获得了对Ser780和Ser795磷酸化的相似效应。帕金森氏病（PD）有效地抑制了MP-MRT-AN（AN），KP-MRT-RY（RY），G401和KP-MRT-NS 8测定。 IC50分别为0.01μM，0.01μM，0.06μM和0.6μM。相反，KP-MRT-YM（YM）细胞系对Palbociclib具有抗性（IC50>10μM）。流式细胞术结果显示，浓度在0-1.0μM之间的Palbociclib以浓度依赖性方式诱导AN，RY，G401和NS细胞系中的G1期阻滞，但对YM细胞没有影响。 BrdU掺入结果与WST-8和流式细胞术结果一致：PD减少AN，RY，G401和NS细胞系中的BrdU掺入（表示G1停滞），但在YM细胞系中减少。 Palbociclib，即使浓度为0.05μM，也能显着降低AN，RY和G401细胞系中的BrdU掺入（p <0.05）。

体内研究：

Palbociclib（PD 0332991）对多种人类肿瘤异种移植物模型表现出显着的抗肿瘤功效。 在携带Colo-205结肠癌异种移植物（p16缺失）的小鼠中，每日口服。 用Palbociclib（150或75mg/kg）给药14天产生快速的肿瘤消退和约50天的相应的肿瘤生长延迟，在测试的最高剂量下具有> 1log的肿瘤细胞杀死。 在37.5mg/kg时，肿瘤在治疗期间缓慢退化。 即使在低至12.5mg/kg的剂量下，也获得了13天的生长延迟，表明肿瘤生长速率的90％抑制。 同样，在MDA-MB-435乳腺癌（p16缺失）中可见到强效的抗肿瘤活性，其中完全肿瘤停滞在150mg/kg是明显的，并且在最高剂量下一些细胞杀伤是明显的。

激酶实验

    CDK测定在96孔滤板中进行。所有CDK-细胞周期蛋白激酶复合物通过杆状病毒感染在昆虫细胞中表达并纯化。用于测定的底物是与GST融合的pRb的片段（氨基酸792-928）（GST·RB-Cterm）。每孔中的总体积为0.1mL，终浓度为20mM Tris-HCl，pH 7.4,50mM NaCl，1mM二硫苏糖醇，10mM MgCl2,25μMATP（对于CDK4-细胞周期蛋白D1，CDK6-细胞周期蛋白D2，和CDK6-细胞周期蛋白D3）或12μMATP（对于CDK2-细胞周期蛋白E，CDK2-细胞周期蛋白A和CDC2-细胞周期蛋白B）含有0.25μCi的[γ-32P] ATP，20ng酶，1μgGST·RB -Cterm和Palbociclib（0.001-0.1μM）。将除[γ-32P] ATP之外的所有组分加入孔中，并将板置于平板混合器上2分钟。通过加入[γ-32P] ATP开始反应，并将板在25℃温育15分钟。通过加入0.1mL 20％三氯乙酸终止反应，并将板在4℃下保持至少1小时以使底物沉淀。然后用0.2mL 10％三氯乙酸将孔洗涤5次，并用β平板计数器测定放射性掺入。

细胞实验

    MRT细胞系，G401，MP-MRT-AN（AN），KP-MRT-RY（RY），KP-MRT-NS（NS）和KP-MRT-YM（YM）细胞系接种于正常生长培养基中进入96孔细胞板。 24小时后，用含有Palbociclib（0.05或1μM）或DMSO的培养基替换培养基。培养细胞并一式三份处理。使用细胞计数试剂盒-8通过WST-8测定在处理后8天测定细胞增殖。

动物实验

    将小鼠（18-22g）随机化，然后皮下植入肿瘤碎片（30mg）到右腋窝区域。当肿瘤达到100至150mg时开始治疗。根据表中所示的方案和剂量给出PD 0332991（150或75mg / kg，口服），并通过管饲法给出图例，基于平均组体重，在乳酸钠缓冲液（50mM，pH4.0）中作为溶液。在所有实验中，对照组中有12只小鼠，处理组中各有8只小鼠。表格图例中给出了每个实验的其他详细信息。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Fry DW, et al. Specific inhibition of cyclin-dependent kinase 4/6 by PD 0332991 and associated antitumor activity in human tumor xenografts. Mol Cancer Ther. 2004 Nov;3(11):1427-38.

[2]. Katsumi Y, et al. Sensitivity of malignant rhabdoid tumor cell lines to PD 0332991 is inversely correlated with p16 expression. Biochem Biophys Res Commun, 2011, 413(1), 62-68.

[3]. Goel S, et al. CDK4/6 inhibition triggers anti-tumour immunity. Nature. 2017 Aug 24;548(7668):471-475.

• 溶解度及制备方案

DMSO	94 mg/mL  (199.58 mM)
Water	94 mg/mL  (199.58 mM)
Ethanol	94 mg/mL  (199.58 mM)

制备储备液

浓度   溶剂体积   质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.1231 mL	10.6157 mL	21.2314 mL
5 mM	0.4246 mL	2.1231 mL	4.2463 mL
10 mM	0.2123 mL	1.0616 mL	2.1231 mL
50 mM	0.0425 mL	0.2123 mL	0.4246 mL

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