• 生物活性

靶点及简介 ：PAK4 inhibitor

PF-3758309 是一种有效的 PAK 抑制剂，能够抑制 PAK4 的活性，IC50 值为 1.3 nM。

PF-3758309是一种口服生物可利用的p21活化激酶4 (PAK4)小分子抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。PF-3758309抑制PAK4底物GEF-H1的磷酸化(IC(50) = 1.3 nM)和一组肿瘤细胞株的非锚定生长(IC(50) = 4.7 +/- 3 nM)。PF-3758309还能抑制A549细胞的增殖(IC50 = 20 nM)和非锚定生长(IC50 = 27 nM)。PF-3758309可阻断多种人肿瘤异种移植的生长，在最敏感的模型中，其血浆EC50值为0.4 nM。在肿瘤模型中，PF-3758309在蛋白质组学研究中抑制pak4依赖的通路，并调节与细胞增殖和生存相关的功能活动。

体外研究：    F-3758309直接与PAK4结合，体外效力为2.7-4.5nM。 PF-3758309具有与其他B组PAKs（PAK5，Ki = 18.1±5.1 nM; PAK6，Ki = 17.1±5.3 nM）和A组PAK1（Ki = 13.7±1.8 nM）的激酶结构域相似的酶效力，但对另外两组A PAK的活性较低（PAK2，IC50 = 190 nM; PAK3，IC50 = 99 nM）。 PAK4在先前表征的丝氨酸残基810上磷酸化GEF-H1并被PF-3758309抑制（IC50 = 1.3±0.5nM）。 PF-3758309还抑制HCT116细胞中内源性pGEF-H1的积累[1]。 PF-3758309在一组92个肿瘤细胞系中的生长抑制活性进行了分析，其中一半的IC50值小于10 nM [2]。用较低剂量（1μM）的PF-3758309处理后，A549细胞的增殖受到影响[3]。

体内研究：   PF-3758309（7.5-30mg / kg BID，po）在包括HCT116和A549模型的五种模型中导致统计学上显着的肿瘤生长抑制（TGI）。在第6天，发现PF-3758309（15mg / kg BID，po）在HCT116肿瘤异种移植物中抑制[3H] FLT摄取32.5％.PF-3758309处理显示HCT116肿瘤中凋亡标记物激活的胱天蛋白酶3显着增加[1]。 PF-3758309（25mg / kg，po）对细胞系异种移植物具有抗增殖作用[4]。

细胞实验：   进行CCK-8测定以确定细胞活力。将细胞以每孔104个细胞的密度接种到含有10％胎牛血清的96孔板中并孵育24小时。然后，用不同浓度（0,0.01,0.03,0.1,0.3,1,3,10和30μM）的PF-3758309处理细胞3天。在暴露期后，更换培养基并与CCK-8溶液（总体积的10％）/孔一起温育30分钟。在450nm处通过分光光度法测量培养基，并通过与0.3％DMSO对照细胞比较来估计活细胞的百分比。

动物实验：    使用五至六周龄的雌性无胸腺裸鼠。将小鼠分成五组，保持12小时光照/黑暗循环，随意提供灭菌食物和水。在任何处理之前允许动物适应环境至少7天。以指数期生长收获所有CRC细胞，并重悬于无血清RPMI 1640和Matrigel的1：1混合物中。使用23号针头将每只小鼠五至一千万个细胞皮下注射到侧腹。每天监测小鼠的毒性迹象并每周称重两次。使用以下公式通过卡尺测量每周评估肿瘤大小两次：肿瘤体积=长度×宽度2×0.52。当肿瘤达到150-300mm 3时，将小鼠随机分成两组，每组至少10个肿瘤。然后通过口服强饲法每天两次用载体对照（0.5％甲基纤维素）或PF-3758309（25mg / kg）处理小鼠14天。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Murray, Brion W., et al. Small-molecule p21-activated kinase inhibitor PF3758309 is a potent inhibitor of oncogenic signaling and tumor growth. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (2010), 107(20), 9446-9451, S94

[2]. Zhao ZS, et al. Do PAKs make good drug targets? F1000 Biol Rep. 2010 Sep 23;2:70.

[3]. Ryu BJ, et al. PF-3758309, p21-activated kinase 4 inhibitor, suppresses migration and invasion of A549 human lung cancer cells via regulation of CREB, NF-κB, and β-catenin signalings. Mol Cell Biochem. 2014 Apr;389(1-2):69-77.

[4]. Pitts TM, et al. Association of the epithelial-to-mesenchymal transition phenotype with responsiveness to the p21-activated kinase inhibitor, PF-3758309, in colon cancer models. Front Pharmacol. 2013 Mar 28;4:35.

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO	98 mg/mL  (199.75 mM)
  Ethanol	98 mg/mL   (199.75 mM)
  Water	Insoluble

  制备储备液
  

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.04 mL	10.19 mL	20.38 mL
  5 mM	0.41 mL	2.04 mL	4.08 mL
  10 mM	0.20 mL	1.02 mL	2.04 mL
  50 mM	0.04 mL	0.20 mL	0.41 mL

  
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