• 生物活性

靶点及简介 ：PLX8394是一种有效的，选择性的Raf抑制剂，抑制BRAFV600E活性的IC50值约为5nM。

PLX8394 potently inhibits phosphorylation of ERK1/2 in PRT #3 and PRT #4 cells at >25 nM and in addition to parental cells at 10 nM. PLX8394 effectively reduces cyclin D3 and cyclin D1, phosphorylation of retinoblastoma protein, and expression of cyclin A2 in parental cells and PRT #3 and PRT #4 cells. PLX8394 inhibits ERK1/2 phosphorylation and the growth of vemurafenib-resistant cells harboring either a BRAF V600K/L505H double mutation or an transposon-induced, N-terminal truncated form of BRAF

体外研究

    PLX8394在> 25nM下有效抑制PRT＃3和PRT＃4细胞中ERK1 / 2的磷酸化，并且除了10nM的亲本细胞外还有效抑制ERK1 / 2的磷酸化。 PLX8394有效减少细胞周期蛋白D3和细胞周期蛋白D1，视网膜母细胞瘤蛋白的磷酸化，以及亲代细胞和PRT＃3和PRT＃4细胞中细胞周期蛋白A2的表达。 PLX8394抑制ERK1 / 2磷酸化和vemurafenib抗性细胞的生长，所述细胞携带BRAF V600K / L505H双突变或转座子诱导的N末端截短形式的BRAF [1]。 PLX8394显着损害肿瘤细胞生长并抑制表达内源性V600E或非V600突变形式BRAF的LA细胞系中的MAPK信号传导[2]。

体内研究

    PLX8394（150mg / kg / d）基本上抑制这些H1755异种移植肿瘤中的肿瘤生长，MAPK途径信号传导和肿瘤细胞增殖，而在小鼠中没有明显的毒性。 PLX8394与厄洛替尼联合使血浆厄洛替尼浓度>1μM[2]。

细胞实验

    对于MTT测定，将2×103个细胞在其常规培养基（含有PRX系的PLX4720）的96孔中一式三份接种。第二天，用PBS洗涤细胞两次，然后补充含有指定的RAF抑制剂的培养基。 48小时后更换培养基，再过48小时后，向孔中加入10μL5mg/ mL MTT试剂，并培养3小时。然后将Formazan晶体用1:10稀释的0.1M甘氨酸（pH 10.5）在DMSO中溶解过夜。然后在Multiskan®频谱分光光度计中以450nM分析孔。所描绘的结果归一化为DMSO条件，并且是三个独立实验的复合物。显示的误差棒代表平均值的标准误差（SEM）。

动物实验

    通过将50×50混合物中的5×10 6个细胞注射到基质胶和PBS中，产生H1755肿瘤异种移植物，产生6至8周龄的雌性NOD / SCID小鼠。一旦肿瘤达到150mm 3的平均大小，将小鼠随机分配到治疗组。 sc植入H1755细胞并使其生长至约200mm 3（植入后4周）。然后用载体，vemurafenib或PLX8394处理小鼠15天。每日口服强饲法的载体是PEG 400 [20％（体积/体积）]，生育酚聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）[5％（体积/体积）]，水[75％（体积/体积）]。将PLX8394溶解于PEG 400 [20％（体积/体积）]，TPGS [5％（体积/体积）]和水[75％（体积/体积）]中并在整个给药期间连续涡旋。每天通过口服强饲法给予PLX8394，剂量为150mg / kg /天。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Basile KJ, et al. Inhibition of mutant BRAF splice variant signaling by next-generation, selective RAF inhibitors. Pigment Cell Melanoma Res.

[2]. Okimoto RA, et al. Preclinical efficacy of a RAF inhibitor that evades paradoxical MAPK pathway activation in protein kinase BRAF-mutant lung cancer. Proc Natl Acad Sci U S A.

• 溶解度及制备方案

DMSO	100 mg/mL    (184.32 mM)
Water	Insoluble
Ethanol	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积      质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	1.8432 mL	9.2161 mL	18.4322 mL
5 mM	0.3686 mL	1.8432 mL	3.6864 mL
10 mM	0.1843 mL	0.9216 mL	1.8432 mL
50 mM	0.0369 mL	0.1843 mL	0.3686 mL

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