• 生物活性

靶点及简介 ：A HAT p300-CBP inhibitor,cell-permeable

一种histone acetyltransferase抑制剂，抑制p300，无细胞试验中Ki为400 nM，相比于其它乙酰转移酶，优先作用于p300。C646 可诱导细胞周期阻滞、细胞凋亡与自噬。

体外研究：

    C646是p300与乙酰辅酶A的线性竞争性抑制剂，Ki为400 nM。 C646显示相对于H4-15肽底物的p300抑制的非竞争性模式。 C646处理降低组蛋白H3和H4乙酰化水平并消除细胞中TSA诱导的乙酰化。 C646对细胞生长的影响比Lys-CoA-Tat更有效[1]。 C646增强IR后的有丝分裂突变并抑制IRin A549细胞后CHK1的磷酸化[2]。 C646减弱了由EDAG诱导的GATA1乙酰化增加和GATA1转录活性增加[3]。

激酶实验:

    在以下反应条件下，反应在30℃下进行2至4分钟：50mM HEPES，pH 7.9,50mM NaCl，0.05mg / mL BSA，5mM DTT，0.05mM EDTA，0.25％DMSO ，10μM的X.laevis组蛋白H3和不同浓度的C646（0,3,10μM）。反应包含70纳克的Rtt109 / Vps75,15纳克的yGcn5,300纳克的SAS络合物或1微克的hMOZ。通过比较样品的考马斯蓝染色与牛血清白蛋白标准品，通过SDS-PAGE分析来估计每个测定中使用的酶量。使混合物在30℃下平衡10分钟，然后加入12C-AcCoA和14C-AcCoA的1：1混合物至终浓度为20μM。在适当的时间后，用6×Tris-Tricine凝胶上样缓冲液淬灭反应，该缓冲液含有0.2mol / LTris-Cl pH 6.8,40％v / v甘油，14％w / v SDS，0.3mol / LDTT和0.06％ w / v考马斯蓝。在16.5％Tris-Tricine SDS-PAGE凝胶上将14 C标记的组蛋白底物与反应物分离。通过放射自显影定量14C掺入组蛋白H3的速率。所有测定均一式两份，这些通常在20％内达成一致。

细胞实验:

    将细胞接种在6孔板中，在37℃下孵育4-10小时以进行附着，并暴露（或不暴露于）C646。温育2小时后，将细胞进行（或不进行）IR，并孵育10天以形成集落。用甲醇固定细胞并用结晶紫染色。计数至少50个细胞的集落。将存活的部分标准化为相应的对照。通过使用线性二次模型计算将存活分数降低至照射细胞的10％（D10）所需的剂量。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Bowers EM, et al. Virtual ligand screening of the p300/CBP histone acetyltransferase: identification of a selective small molecule inhibitor. Chem Biol. 2010 May 28;17(5):471-82.

[2]. Oike T, et al. C646, a selective small molecule inhibitor of histone acetyltransferase p300, radiosensitizes lung cancer cells by enhancing mitotic catastrophe. Radiother Oncol. 2014 May;111(2):222-7.

[3]. Zheng WW, et al. EDAG positively regulates erythroid differentiation and modifies GATA1 acetylation through recruiting p300. Stem Cells. 2014 Aug;32(8):2278-89.

• 溶解度及制备方案

DMSO	13 mg/mL   (29.19 mM)
Water	Insoluble
Ethanol	Insoluble

• 制备储备液

浓度   溶剂体积   质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.2451 mL	11.2254 mL	22.4507 mL
5 mM	0.4490 mL	2.2451 mL	4.4901 mL
10 mM	0.2245 mL	1.1225 mL	2.2451 mL



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