• 生物活性

靶点及简介 ：

GW4869 is a noncompetitive neutral sphingomyelinase inhibitor with an IC50 of 1 uM.GW-4869 is a cell-permeable, non-competitive inhibitor of neutral sphingomyelinases (IC50 = 1 μM). It inhibits TNF-α-mediated sphingomyelin hydrolysis (100% inhibition at 20 μM). GW4869 is cytotoxic to high phosphatidylserine-expressing myeloma cells. Blockade of exosome generation with GW4869 dampens the sepsis-induced inflammation and cardiac dysfunction.

GW4869 (GW69A, GW554869A) 是中性Smase(鞘磷脂酶)的非竞争性抑制剂，IC50为1 μM。它对N-SMase具有选择性，在浓度高达150 μM时对酸性SMase没有抑制作用，它也是一种常见的外泌体抑制剂

体外研究：

    GW4869（10μM）部分抑制TNF诱导的鞘磷脂（SM）水解，并且20μM化合物完全免于SM的损失。添加10-20μMGW4869完全抑制神经酰胺的初始积累，而这种效应在稍后的时间点（24小时）部分丧失。 GW4869的作用发生在谷胱甘肽下降的下游。 GW4869能够以剂量依赖性方式显着防止细胞死亡。这些保护作用伴随着线粒体和胱天蛋白酶9活化的细胞色素c释放的显着抑制，因此在线粒体功能障碍的上游定位N-SMase活化[1]。

体内研究：

    用GW4869预处理显着损害RAW264.7巨噬细胞中外来体和促炎细胞因子（TNF-α，IL-1β，IL-6）的释放。在LPS处理或CLP手术后12小时，用GW4869预处理的WT小鼠在血清中显示出比对照PBS注射小鼠更低量的外泌体和促炎细胞因子。因此，GW4869治疗可减少脓毒症引起的心脏炎症，减轻心肌抑制并延长生存期[2]。

激酶实验：

    B. cereu sphosphatidylcholine-PLC在存在或不存在10μMGW4869的情况下在含有100mM Tris，pH7.2,25％甘油，20mM对硝基苯基/磷酰胆碱的反应混合物中温育，并且通过分光光度法定量生产对硝基苯酚在410纳米。将来自牛肾的蛋白磷酸酶2A在GW4869存在或不存在下在含有50mM Tris，pH7.4,1mM二硫苏糖醇，100μMMnCl2和20％甘油的缓冲液中温育，并测量磷酸酶活性[1]。

细胞实验： 

  用GW4869处理细胞30分钟，然后以10μL/孔加入TNF。在指定的时间点，向每个孔中加入25μLMTT储备溶液，并在37℃，5％CO 2中孵育3小时。细胞活力是使用MTT测定[1]。

动物实验： 

  小鼠：将小鼠随机分成四组：PBS，GW4869，PBS + LPS和GW4869 + LPS（每组n = 5）。 GW4869以2.5μg/ g的一个剂量腹膜内（ip）注射。在ip注射LPS（25μg/ g）之前1小时腹膜内预注射PBS + LPS组中的小鼠。将GW4869 + LPS组中的小鼠腹膜内注射GW4869（2.5μg/ g）1小时，然后腹膜内注射LPS（25μg/ g，100μl）。小鼠接受PBS注射至与对照相当的体积（100μl）。每6小时监测PBS + LPS和GW4869 + LPS组的存活率，持续36小时[2]。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Luberto C, et al. Inhibition of tumor necrosis factor-induced cell death in MCF7 by a novel inhibitor of neutralsphingomyelinase. J Biol Chem. 2002 Oct 25;277(43):41128-39.

[2]. Essandoh K, et al. Blockade of exosome generation with GW4869 dampens the sepsis-induced inflammation and cardiac dysfunction. Biochim Biophys Acta. 2015 Nov;1852(11):2362-71.

[3]. Nakamura H, et al. Sphingomyelin Regulates the Activity of Secretory Phospholipase A2 in the Plasma Membrane. J Cell Biochem. 2015 Sep;116(9):1898-907.

• 溶解度及制备方案
  溶解度
  

  DMSO	1 mg/mL  (1.73 mM)
  Water	Insoluble
  Ethanol	Insoluble

  制备储备液

  Concentration / Solvent Volume / Mass	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	1.73 mL	8.66 mL	17.32 mL
  5 mM	0.35 mL	1.73 mL	3.46 mL
  10 mM	0.17 mL	0.87 mL	1.73 mL
  50 mM	0.03 mL	0.17 mL	0.35 mL

  
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