• 生物活性

靶点及简介 ：Antioxidant, anti-inflammatory and immunosuppressive agent

一种蛋白酶体抑制剂，具有抗炎以及抗氧化的活性，有效且优先抑制20S 蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性，IC50 为2.5 μM。

Celastrol (Tripterin) 下调了基础和DNA损伤剂诱导的FANCD2单泛素化作用，然后是蛋白降解作用。Celastrol治疗可消除IR诱导的G2检查点，并通过消耗FANCD2增强ICL药物诱导的DNA损伤和对肺癌细胞的抑制作用。Celastrol对体外培养的DU145细胞具有显著的抑制和诱导凋亡作用，且呈时间和剂量依赖性。Celastrol的抗前列腺癌作用部分是通过下调DU145细胞中hERG通道的表达水平，提示Celastrol可能是一种潜在的抗前列腺癌药物，其机制可能是阻断hERG通道。Celastrol通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路上调自噬来改善IL-10缺陷小鼠的实验性结肠炎。Celastrol具有抑制细胞色素P450活性的潜力，并可能引起中草药相互作用。Celastrol诱导TNBC细胞凋亡，提示细胞凋亡可能通过线粒体功能障碍和PI3K/Akt信号通路介导。Celastrol 可通过ROS/JNK信号传导途径诱导凋亡和自噬。Celastrol 通过激活线粒体凋亡可抑制帕金森氏病的多巴胺能神经元死亡。

体外研究

    Tripterin(Celastrol)以浓度依赖性方式显着抑制PC-3细胞中的蛋白酶体胰凝乳蛋白酶活性;在2.5μM时,它达到约55％的抑制,与其对纯化的20S蛋白酶体的效力(IC 50 =2.5μM)相当。此外,观察到IκB-α,Bax和p27水平增加,三种众所周知的用Celastrol处理的PC-3细胞中蛋白酶体的靶蛋白[1]。

体内研究

    用Tripterin(Celastrol)(1-3mg/kg /天,腹膜内注射,1-31天)治疗携带PC-3肿瘤的裸鼠导致肿瘤生长的显着抑制(65-93％)[1]。用3和6 mg/kg Tripterin(Celastrol)治疗后,丙二醛(MDA)水平分别显着下降35.2％和36.7％(P <0.05)。用3和6mg/kg Tripterin(Celastrol)治疗显着恢复GSH水平(P <0.05)至几乎正常水平[2]。

激酶实验

    将纯化的兔20S蛋白酶体（0.1μg）与40μL各种荧光肽底物在100μL测定缓冲液（20mM Tris-HCl，pH 7.5）中，在不同浓度的Celastrol或Oridonin存在下或在溶剂DMSO中孵育在37℃下保持2小时，然后测量每种蛋白酶体活性的抑制[1]。

细胞实验

    将前列腺癌细胞（5,000-8,000）接种于96孔板的每个孔中，然后用DMSO，Tripterin（Celastrol）或Oridonin以不同浓度处理12至16小时，然后再孵育2小时。用Z-Gly-Gly-Leu-AMC（40μM）。之后，使用整个平板[1]测量蛋白酶体活性。

动物实验

    小鼠[1]使用5周龄的雄性裸免疫缺陷小鼠NCRNU-M。在第0天，将悬浮于0.1mL无血清RPMI 1640中的人前列腺癌PC-3或C4-2B细胞（5-10×106）皮下接种于每只小鼠的右胁腹（每组4只小鼠）。对于使用PC-3细胞的第一个实验，在接种后第14天，动物每天腹膜内注射50至100μL载体[10％DMSO，70％Cremophor /乙醇（3：1）和20％） PBS]和1.0或3.0mg / kg的Tripterin（Celastrol）。使用卡尺每天测量肿瘤大小，并使用标准公式计算它们的体积：宽度2×长度/ 2。每周测量体重。为了研究在实验的早期阶段蛋白酶体是否被抑制，在处理3天后，处死一只对照和一只3.0mg / kg Tripterin（Celastrol）处理的小鼠。当对照肿瘤达到1,400mm 3时，在治疗16天后处死其余的。对于接种后12天的第二次PC-3肿瘤实验，将小鼠随机分成三组，并在研究期间（31天）用对照，Tripterin（Celastrol）或冬凌草甲素以1.5mg / kg每天治疗。 。在另一个实验中，为了研究Tripterin（Celastrol）对AR表达的影响，携带C4-2B肿瘤的裸鼠每天腹膜内注射载体或3.0mg / kg Tripterin（Celastrol）。将体重为161±9g的大鼠[2]雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（n = 90,6周龄）随机分成对照（NC）和高能量饮食（HED）组。在对照组中，动物接受标准食物饮食，而HED组中的大鼠喂食另外的高能乳液。在各自饮食8周后，将溶于0.1mol / l柠檬酸盐缓冲液（pH4.5）的链脲佐菌素（STZ; 45mg / kg）注射到HED组大鼠的尾静脉中以建立T2DM模型，同时对照组大鼠注射柠檬酸钠缓冲液。选择STZ注射后第7天血糖水平≥16.7mM的大鼠作为糖尿病模型。平均而言，注射STZ的大鼠中有80％符合这些标准。在注射STZ后1周，将成功诱导糖尿病的大鼠随机分为糖尿病模型（DM）组，Tripterin（Celastrol）低剂量组（1mg / kg /天），Tripterin（Celastrol） ）中剂量组（3mg / kg /天）和Tripterin（Celastrol）高剂量组（6mg / kg /天）（每组n = 15只大鼠）。治疗组中的大鼠通过管饲法施用Tripterin（Celastrol），而NC和DM组中的大鼠施用等量的蒸馏水（2mL）。在各处理8周后，通过腹膜内注射戊巴比妥钠（30mg / kg体重）麻醉大鼠，收集组织样品用于分析。从大鼠体切除椎旁肌，并沿纵轴垂直切割并固定在磷酸盐缓冲的20％甲醛中。然后制备组织学石蜡包埋的切片（5μm）用于H＆E染色。将椎旁肌切片在液氮中快速冷冻并储存在-80℃直至进一步分析。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Yang H, et al. Celastrol, a triterpene extracted from the Chinese "Thunder of God Vine," is a potent proteasome inhibitor and suppresses human prostate cancer growth in nude mice. Cancer Res. 2006 May 1;66(9):4758-65

[2]. Guan Y, et al. Celastrol attenuates oxidative stress in the skeletal muscle of diabetic rats by regulating the AMPK-PGC1α-SIRT3 signaling pathway. Int J Mol Med. 2016 May;37(5):1229-38.

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO	90 mg/mL  (199.73 mM)
  Ethanol	Insoluble
  Water	Insoluble

Preparing Stock Solutions

Concentration/Volume/Mass	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.2192 mL	11.0961 mL	22.1921 mL
5 mM	0.4438 mL	2.2192 mL	4.4384 mL
10 mM	0.2219 mL	1.1096 mL	2.2192 mL
50 mM	0.0444 mL	0.2219 mL	0.4438 mL

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