• 生物活性

靶点及简介 ：TβRI/II kinase inhibitor

LY2109761是一种新型的，选择性的TGF-β receptor type I/II (TβRI/II)双重抑制剂，Ki分别为38 nM和300 nM，对Smad2的磷酸化产生负面影响。LY2109761 处理FG/GLT或L3.6pl/GLT单层细胞生长，没有抗增殖效果，但是显著抑制L3.6pl/GLT细胞低贴壁生长，这种作用存在剂量依赖性，按2 μM 和 20 μM处理，则抑制分别为~33% 和73%, 与 Gemcitabine联用可强增强这种效果。LY2109761(5 μM)阻断TβRI/II激酶活性，完全抑制基础型和TGF-β1刺激的L3.6pl/GLT cells细胞迁移和入侵,显著增强脱离诱导的凋亡，处理8小时，凋亡达 26%，且完全抑制TGF-β诱导的Smad2磷酸化。 1 nM LY2109761通过提高E-钙粘蛋白表达，而显著阻断迁移和入侵，而不会抑制肝癌细胞的粘附。

体外研究：

    LY2109761以剂量依赖性方式显着抑制L3.6pl / GLT软琼脂集落的生长，并且导致在2μM时抑制33％，在20μM时抑制73％。用LY2109761（5μM）靶向TβRI/ II激酶活性几乎完全抑制L3.6pl / GLT细胞的基础和TGF-β1刺激的迁移[1]。 LY2109761诱导Smad-2磷酸化的剂量依赖性降低。 LY2109761抑制Smad-2的HLE内源性磷酸化。 LY2109761通过三维结构阻断不同ECM蛋白的迁移和HLE和HLF的入侵。 LY2109761在24小时后增加E-钙粘蛋白mRNA表达，在48小时后增加蛋白质水平[2]。 LY2109761预处理降低了辐射后U87MG和T98细胞培养物中的克隆形成存活率，导致放射敏感性增加，DEF0.1分别为1.30和1.37 [3]。

体内研究

    LY2109761（50mg / kg，po）大大降低肿瘤体积并将小鼠的中位存活持续时间增加至45.0天。用LY2109761处理的小鼠显着减少转移性病变，并且在一些中，没有转移性病变，如GFP信号所示，可以在腹部中鉴定[1]。 LY2109761在BALB / c裸鼠的U87MG皮下异种移植肿瘤模型中增强辐射诱导的肿瘤生长延迟。 LY2109761增加了原位CSLC胶质母细胞瘤模型的存活率并增强了抗辐射的抗肿瘤活性[2]。

细胞实验

    用冷PBS洗涤L3.6pl / GLT细胞两次，并在4℃下裂解成RIPA缓冲液（50mM Tris HCl [pH 8]，150mM NaCl，1％NP-40,0.5％脱氧叶酸钠和0.1％SDS）。 ）。用电均化器将肿瘤和肝脏样品均质化到RIPA缓冲液中，然后在4℃下持续搅拌2小时。通过离心清除裂解物。通过8％SDS-PAGE分离每种裂解物（20μg蛋白质）并用针对总ERK1 / 2，TβRI和TβRII的多克隆兔抗体或针对磷酸化Smad2，总Smad2，磷酸化ERK1 / 2的单克隆小鼠抗体进行探测，并且磷酸化和总JNK。根据制造商的说明书，用Lumi-Light Western印迹底物显现免疫反应性蛋白质。使用ImageQuant软件计算磷酸化的Smad2 / Smad2条带密度比。

动物实验

    将50只小鼠随机分成5组（每组n = 5只小鼠），每天两次接受50μLLY2109761或50mg / kg LY2109761的po载体。第0天，用1.5％异氟醚 - 空气混合物麻醉小鼠，产生小的左腹侧翼切口，并将脾脏小心地置于外面。从第-5天至第0天在LY2109761（5μM）或DMSO存在下培养的L3.6pl / GLT或C5LM2 / GLT细胞（1.0×10 5个细胞/50μLHBSS）用30接种到脾脏中。 - 针。脾脏的可见变性是成功接种的标准。 10分钟后，使用高温烧灼除去脾脏以避免脾脏中胰腺肿瘤细胞的异位生长可能是血源性肝转移细胞的混杂来源的可能性。腹壁用伤口夹一层封闭。对于接种未处理细胞的一组未处理小鼠，继续每天两次po（接种后每周1-5天）用50mg / kg LY2109761处理。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Melisi D, et al. LY2109761, a novel transforming growth factor beta receptor type I and type II dual inhibitor, as a therapeutic approach to suppressing pancreatic cancer metastasis. Mol Cancer Ther, 2008, 7(4), 829-840.

[2]. Fransvea E, et al. Blocking transforming growth factor-beta up-regulates E-cadherin and reduces migration and invasion of hepatocellular carcinoma cells. Hepatology, 2008, 47(5), 1557-1566.

[3]. Zhang M, et al. Blockade of TGF-β signaling by the TGFβR-I kinase inhibitor LY2109761 enhances radiation response and prolongs survival in glioblastoma. Cancer Res, 2011, 71(23), 7155-7167

• 溶解度及制备方案
  

  DMSO	9 mg/mL  (20.38 mM)
  Water	Insoluble
  Ethanol	Insoluble

制备储备液

浓度   溶剂体积     质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.2649 mL	11.3245 mL	22.6490 mL
5 mM	0.4530 mL	2.2649 mL	4.5298 mL
10 mM	0.2265 mL	1.1325 mL	2.2649 mL

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