• 生物活性

靶点及简介 ：

Cell-permeable, irreversible pan-caspase inhibitor，Z-VAD(OMe)-FMK 是一种可渗透细胞的不可逆 pan-caspase 抑制剂，在THP.1 和 Jurkat T细胞中阻断细胞凋亡的所有特性。

Z-VAD-FMK是一种可渗透细胞的，不可逆pan-caspase抑制剂，抑制细胞凋亡的全部特性。Z-VAD-FMK(10 μM)作用于THP.1细胞，抑制细胞凋亡。Z-VAD-FMK(10 μM)作用于完整THP.1和 Jurkat细胞，抑制CPP32加工。

体外研究:

    Z-VAD（OMe）-FMK是一种广谱半胱天冬酶抑制剂，已被证明可抑制半胱天冬酶样蛋白酶的细胞内活化。注射Z-VAD（OMe）-FMK可抑制肺组织中caspase-3的活性，并显着降低末端dUTP缺口末端标记阳性细胞的数量[1]。在SAH之前1小时和之后6小时腹膜内施用Z-VAD（OMe）-FMK。检查胱天蛋白酶-3和阳性TUNEL的表达作为细胞凋亡的标志物。 Z-VAD（OMe）-FMK抑制内皮细胞中的TUNEL和caspase-3染色，降低caspase-3活化，降低BBB通透性，缓解血管痉挛，消除脑水肿，并改善神经功能[2]。 Z-VAD（OMe）-FMK是一种细胞渗透性半胱天冬酶抑制剂，可有效阻断SMN缺乏引起的细胞死亡[3]。

体内研究 :  

 注射Z-VAD（OMe）-FMK可显着延长小鼠的存活率。所有小鼠在30小时内死于LPS。相比之下，用Z-VAD（OMe）-FMK治疗的小鼠存活时间显着更长，27％的小鼠存活超过7天[1]。

细胞实验: 

  含有dSMN编码序列的PCR产物（正向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG AAG ACG TAC GAC GAG TCG-3';和反向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG GTG GTG CTG GCT TCT TTC-3';产物长度，601bps;粗体和斜体字母代表T7启动子序列）和对照果蝇早老素（dPsn）基因（正向引物：5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG TG GCT GCT GTC AAT CTC-3和;和反向引物：获得5'-TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG CGA TAG CAA CGC TTC TTG-3';产物长度：543bps）并进行凝胶纯化。通过用Ribomax T7转录试剂盒转录产生双链RNA（dsRNA），并用无Rnase的DNA酶消化。将dsRNA产物乙醇沉淀并通过在65℃温育30分钟退火，然后在室温下缓慢冷却。在1％agaorse凝胶上分析退火的dsRNA产物，以确保大多数dsRNA作为单一条带存在。通过使用Cellfectin将dsRNA（2μg）和/或质粒DNA（2μg）引入细胞中。通过在培养基中使用50μM的Z-VAD（OMe）-FMK来实现胱天蛋白酶抑制[3]。

动物实验:

    小鼠[1]本研究中使用的小鼠是5至6周龄（20至22克）ICR男性。通过尾静脉从大肠杆菌血清型O111：B4向小鼠注射30mg / kg LPS。在LPS注射前15分钟进行单次静脉内注射Z-VAD（OMe）-FMK（0.25mg），然后每小时静脉内注射三次Z-VAD（OMe）-FMK（每次0.1mg）。对照小鼠用无菌盐水中相同体积的1％DMSO注射。大鼠[2]用α-氯醛糖（40mg / kg IP）和尿烷（400mg / kg IP）麻醉重300-350g的雄性Sprague-Dawley大鼠。对动物进行插管，并用小型动物呼吸器维持呼吸。使用加热垫将直肠温度维持在37±0.5°C。分离左外颈动脉，并通过颈内动脉插入4.0单丝尼龙缝合线以穿透大脑中动脉。在每只大鼠尸检时确认SAH。假手术的大鼠经历相同的程序，除了在感觉到抵抗后撤回缝合线。在SAH诱导前1小时和6小时腹膜内注射Z-VAD（OMe）-FMK（每0.3mL50μM）。在赋形剂组中，对大鼠进行SAH诱导，并用相同体积的载体（在生理缓冲液中稀释的DMSO）处理。在假手术动物中不进行任何治疗。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Kawasaki M, et al. Protection from lethal apoptosis in lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice by a caspaseinhibitor. Am J Pathol. 2000 Aug;157(2):597-603.

[2]. Park S, et al. Neurovascular protection reduces early brain injury after subarachnoid hemorrhage. Stroke. 2004 Oct;35(10):2412-7.

[3]. Ilangovan R, et al. Inhibition of apoptosis by Z-VAD-fmk in SMN-depleted S2 cells. J Biol Chem. 2003 Aug 15;278(33):30993-9.

• 溶解度及制备方案
  
  溶解度
  

  DMSO	93 mg/mL (198.93 mM)
  Ethanol (warmed with 50ºC water bath)	2 mg/mL (4.28 mM)
  Water	Insoluble

  制备储备液
  

  浓度 溶剂体积 质量	1 mg	5 mg	10 mg
  1 mM	2.1391 mL	10.6954 mL	21.3908 mL
  5 mM	0.4278 mL	2.1391 mL	4.2782 mL
  10 mM	0.2139 mL	1.0695 mL	2.1391 mL
  50 mM	0.0428 mL	0.2139 mL	0.4278 mL

  
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