• 生物活性

靶点及简介 ：

Procaspase-3 activator

一种有效的procaspase-3（酶原-3）激活剂，EC50为0.22 μM，是第一个已知的直接激活酶原e-3为caspase-3的小分子。

体外研究：

    PAC-1激活procaspase-3，EC50为2.08μM。 PAC-1表现出增强的锌螯合能力（EC50 =7.08μM）。 PAC-1诱导白血病细胞死亡，IC50为4.03μM，这与其他研究者报道的值一致。 PAC-1处理还导致其他恶性细胞以浓度依赖性方式死亡，IC50为4.03至53.44μM。 15种恶性细胞系中的总平均IC50对于WF-210为0.88mM，对于PAC-1为19.40μM。相反，正常人细胞（PBL，L-02，HUVEC和MCF 10A）对WF-210的敏感性比PAC-1低2.6倍（平均IC50 =412.34μM）（平均IC50 =158.29μM）[ 1]。 Procaspase活化化合物-1（PAC-1）是第一个发现的直接激活caspase的化合物。 PAC-1处理上调多种细胞系中的Ero1α，而Ero1α的沉默显着抑制ER从细胞内释放钙和细胞死亡[2]。

体内研究

    为了评估WF-210对恶性肿瘤生长的体内作用，我们检测了WF-210在小鼠Hep3B和MDA-MB-435异种移植模型中抑制肿瘤生长的能力。这两种细胞系以相对高的水平表达procaspase-3。允许由肝癌细胞Hep3B的异种移植物诱导的肿瘤发展并生长至100mm 3的大小，之后每天给予WF-210（2.5mg / kg）或PAC-1（5.0mg / kg）两周。通过静脉内（iv）给药。如PAC-1和WF-210所示，显着抑制Hep3B肿瘤异种移植物的生长[1]。

激酶实验

    将各种浓度的WF-210或PAC-1加入到含有50mM HEPES，0.1％CHAPS，10％甘油，100mM NaCl，0.1mM EDTA，10mM DTT pH 7.4的缓冲液中的procaspase-3中，并孵育12小时。在37°C。最终体积为10mL，procaspase-3的最终浓度为1mM。然后加入40mL含有50mM HEPES pH 7.4,100mM NaCl，10mM DTT，0.1mM EDTA二钠盐，0.10％CHAPS，10％甘油的缓冲液中的底物Ac-DEVD-pNA（终浓度0.4mM）。在405nm处读取板的吸光度总共1小时。每个孔的线性部分的斜率被确定为酶活性[1]。

细胞实验

    使用MTT方法或Cell Titer-Glo发光测定法测量细胞活力。对于MTT测定，将细胞（1×10 5个细胞/ mL）接种到96孔培养板中。孵育过夜后，用各种浓度的试剂（PAC-1，WF-210或其他试剂）处理细胞24或72小时。然后向每个孔中加入10mL MTT溶液（在PBS中2.5mg / mL），并将板在37℃下再温育4小时。离心（2500rpm，10分钟）后，吸出含有MTT的培养基，加入100mL DMSO。用Biotek Synergy HT读数器在570nm处测量每个孔的光密度。 Cell Titer-Glo试剂盒用于确定细胞内ATP作为活细胞生物标志物的相对水平[1]。

动物实验

    小鼠[1]确定WF-210，活人胆囊癌GBC-SD细胞（每只小鼠5×106/100 mL PBS），人乳腺癌MDA-MB-435细胞的体内抗肿瘤活性（1×每只小鼠107/100 mL PBS），人肝癌Hep3B细胞（每只小鼠5×106/100 mL PBS）和人乳腺癌MCF-7细胞（每只小鼠1×107/100 mL PBS）皮下注射（sc）进入7至8周龄雄性SCID小鼠或Balb / c裸鼠的右侧腹侧。在注射前通过台盼蓝染色确认细胞数。特别地，MCF-7异种移植小鼠也在隔天给予激素17-β-雌二醇（3mg / kg）。当平均sc肿瘤体积达到100mm 3时，将小鼠随机分成各种治疗组和对照组（每组8只小鼠）。用卡尺每两天测量肿瘤大小（计算体积=最短直径2×最长直径/ 2）。每两天记录一次体重，饮食消耗和肿瘤大小。两周或四周后，处死小鼠并切除肿瘤并储存在-80℃直至进一步分析。

• 验证及参考文献

验证：

参考文献：

[1]. Wang F, et al. A novel small-molecule activator of procaspase-3 induces apoptosis in cancer cells and reduces tumor growth in human breast, liver and gallbladder cancer xenografts. Mol Oncol. 2014 Dec;8(8):1640-52.

[2]. Seervi M, et al. ERO1α-dependent endoplasmic reticulum-mitochondrial calcium flux contributes to ER stress and mitochondrial permeabilization by procaspase-activating compound-1 (PAC-1). Cell Death Dis. 2013 Dec 19;4:e968.

[3]. Putt KS, et al. Small-molecule activation of procaspase-3 to caspase-3 as a personalized anticancer strategy. Nat Chem Biol. 2006 Oct;2(10):543-50

• 溶解度及制备方案

DMSO	78 mg/mL  (198.73 mM)
Ethanol	78 mg/mL (198.73 mM)
Water	Insoluble

制备储备液

浓度/溶剂体积/质量	1 mg	5 mg	10 mg
1 mM	2.5478 mL	12.7392 mL	25.4784 mL
5 mM	0.5096 mL	2.5478 mL	5.0957 mL
10 mM	0.2548 mL	1.2739 mL	2.5478 mL
50 mM	0.0510 mL	0.2548 mL	0.5096 mL

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